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第一章　分光光度技术1

第一节　基本原理1

一、光的基本知识1

二、朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律2

三、吸光系数3

第二节　分光光度计的基本结构和使用3

一、分光光度计的基本结构3

二、分光光度计的基本类型5

三、常见分光光度计的使用5

四、使用分光光度计的注意事项6

第三节　分光光度技术的应用6

一、定量分析6

二、定性分析7

第四节　分光光度法的误差8

一、物理性原因产生的误差8

二、化学性原因引起的误差8

第二章　色谱技术9

第一节　概述9

一、色谱法的概念9

二、色谱技术的特点和优点9

三、色谱法的分类10

第二节　常用的色谱方法11

一、吸附色谱（adsorption chromatography）11

二、分配色谱（partition chromatography）12

三、凝胶色谱（gel chromatography）12

四、离子交换色谱（ion exchange chromatography,IEC）16

五、亲和色谱（affinity chromatography）18

六、高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）18

第三章　电泳技术19

第一节　基本原理19

一、蛋白质电荷的来源19

二、迁移率（mobility）19

三、影响电泳速度的因素20

第二节　醋酸纤维薄膜电泳22

第三节　琼脂糖凝胶电泳22

一、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系22

二、核酸构象与琼脂糖凝胶电泳分离的关系23

三、琼脂糖凝胶电泳基本方法简介23

第四节　聚丙烯酰胺凝胶电泳24

一、聚丙烯酰胺凝胶聚合原理及相关特性25

二、聚丙烯酰胺凝胶电泳原理26

三、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳原理28

四、聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳原理29

五、聚丙烯酰胺凝胶双向电泳原理29

第五节　染色方法30

一、蛋白质染色30

二、脂蛋白染色31

三、核酸的染色31

第四章　离心技术33

第一节　离心技术的基本原理33

一、离心力（centrifugal force）33

二、相对离心力（relative centrifugal force）33

三、重力及浮力34

四、介质的摩擦阻力34

五、沉降速度34

六、沉降系数（sedimentation coefficient）35

七、沉降时间（sedimentation time）35

第二节　离心机的分类35

第三节　离心分离的种类36

一、差速离心法36

二、密度梯度离心法36

第四节　离心操作注意事项37

第五章　蛋白质组技术39

第一节　蛋白质组学39

第二节　蛋白质组分离技术39

一、双向凝胶电泳的特点40

二、双向凝胶电泳的基本步骤40

第三节　蛋白质组分析技术41

一、质谱技术的发展及各种类型的质谱仪41

二、质谱技术在蛋白质组研究中的作用42

三、蛋白质组数据库的建立43

四、蛋白质组研究的前景43

第六章 生物大分子制备技术44

第一节　预处理和细胞的分离44

一、选择材料及预处理44

二、细胞的分离45

第二节　细胞的破碎及细胞器的分离45

一、细胞的破碎45

二、细胞器的分离47

第三节　生物大分子的提取、分离纯化和定量47

一、蛋白质的提取47

二、蛋白质的分离纯化48

三、核酸的分离纯化50

四、蛋白质的定量51

五、DNA、RNA的定量53

第四节　浓缩、干燥及保存53

一、蛋白质的浓缩53

二、核酸的浓缩54

三、干燥56

四、保存56

第七章　重组DNA技术57

第一节 目的基因的获取57

一、直接从染色体中分离58

二、化学合成法58

三、RT-PCR58

四、聚合酶链反应（PCR）58

第二节　载体的选择58

一、克隆载体（clone vector）58

二、表达载体（expression vector）58

第三节　分子克隆常用的工具酶59

第四节 限制性内切酶消化DNA及片段回收60

一、限制性内切酶的选择和运用60

二、限制性内切酶的酶切60

三、DNA片段的回收61

第五节 目的基因与载体片段连接61

第六节　重组DNA导入宿主细胞62

一、大肠杆菌的转化62

二、电脉冲穿孔法转化大肠杆菌63

第七节　含重组质粒的宿主菌落的筛选与鉴定63

一、利用宿主细胞遗传表型的改变进行筛选63

二、分析重组子分子结构特性进行鉴定64

第八章　核酸分子杂交技术66

第一节　核酸分子杂交的基本理论66

一、DNA变性66

二、DNA复性66

三、核酸分子杂交67

第二节　核酸探针及其标记67

一、核酸探针67

二、探针标记物67

三、探针的标记方法68

第三节　核酸分子杂交69

一、影响杂交的因素69

二、固相杂交法70

第九章　聚合酶链反应（PCR）技术73

第一节　PCR基本原理和影响因素73

一、基本原理73

二、PCR反应体系73

三、PCR反应步骤简介75

四、PCR引物设计原则76

五、PCR的影响因素76

六、PCR扩增过程中的一些疑难问题与解决方法79

第二节　逆转录PCR技术80

一、RT-PCR反应基本步骤81

二、RT-PCR注意事项82

第三节　PCR技术进展83

一、定量PCR83

二、巢式PCR87

第十章　常用生化实验及临床生化检验88

实验一　血糖的测定88

实验二　蛋白质的定量测定90

实验三　血红蛋白与核黄素的凝胶柱色谱分离92

实验四　氨基酸的离子交换柱色谱分离94

实验五　血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳95

实验六　血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳97

实验七　过氧化氢酶Km值的测定99

实验八　酶的竞争性抑制作用（琥珀酸脱氢酶）102

实验九　四氯化碳对小鼠肝脏的损伤103

实验十 血清总胆固醇的测定106

实验十一 回收实验（尿素氮的回收）107

实验十二　血清白蛋白、γ-球蛋白的分离纯化及鉴定108

实验十三　碱性磷酸酶的分离纯化112

实验十四　双向电泳115

第十一章 分子生物学实验——重组DNA表达载体的构建119

实验一 质粒DNA的大量制备与纯化119

实验二　DNA的纯度、浓度的测定122

实验三 目的基因的获取124

实验四　DNA的限制性内切酶消化128

实验五　从琼脂糖凝胶中分离回收DNA片段130

实验六　DNA片段的连接反应131

实验七　用重组质粒DNA转化大肠杆菌132

实验八　含重组质粒的细菌菌落的鉴定133

实验九　Southern印迹法135

实验十　斑点杂交——地高辛标记核酸探针的斑点杂交（Dot blot）138

实验须知141

实验报告的书写141

参考文献142