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第一篇 医学寄生虫病诊断技术3

第一章 病原学诊断技术3

第一节 粪便检查技术3

一、直接涂片法3

二、改良加藤法4

三、浓集法4

四、钩蚴培养法8

五、毛蚴孵化法9

六、成虫检查法9

七、染色检查法10

第二节 肛周虫卵检查技术12

一、透明胶纸法12

二、棉签拭子法12

三、胶膜粘贴法13

第三节 血液检查技术13

一、血涂片制作技术13

二、血涂片染色技术14

三、其他血液检查方法16

第四节 活组织检查技术17

一、淋巴结活组织检查技术17

二、皮肤活组织检查技术17

三、肌肉活组织检查技术18

四、肠黏膜活组织检查技术18

五、肺活组织检查技术19

六、肝脾活组织检查技术20

第五节 其他标本的检查技术20

一、尿液检查技术20

二、痰液检查技术20

三、十二指肠抽取物检查技术21

四、阴道分泌物检查技术21

五、脑脊液检查技术22

六、骨髓检查技术22

七、其他检查技术23

第二章 免疫学诊断技术24

第一节 抗原制备技术25

一、寄生虫抗原种类25

二、抗原制备技术26

三、寄生虫抗原的制备31

第二节 抗体制备技术33

一、多克隆抗体34

二、单克隆抗体35

三、基因工程抗体36

第三节 皮肤试验技术37

一、皮内试验37

二、挑刺试验38

第四节 凝集反应技术39

一、间接血凝试验39

二、间接血凝抑制试验42

三、胶乳凝集试验42

第五节 沉淀反应技术43

第六节 免疫电泳技术44

第七节 免疫标记技术45

一、免疫荧光标记技术46

二、放射免疫标记技术49

三、酶免疫标记技术49

四、胶体金标记技术58

五、生物素—亲和素标记技术60

六、免疫电镜技术61

第八节 免疫组织化学技术62

一、免疫组织化学的金过程62

二、免疫组织化学技术64

第九节 寄生虫学特有的免疫诊断技术66

一、环蚴沉淀试验66

二、尾蚴膜试验66

三、弓形虫染色试验67

第三章 寄生虫感染的影像诊断68

第一节 脑部影像学诊断技术68

一、脑囊虫病68

二、脑包虫病71

三、脑血吸虫病72

四、脑型肺吸虫病74

五、脑弓形虫病75

第二节 肺部影像学诊断76

一、肺型并殖吸虫病76

二、肺包虫病79

三、肺型血吸虫病82

第三节 肝部影像学诊断技术83

一、肝包虫病83

二、肝血吸虫病86

三、肝华支睾吸虫病87

四、阿米巴肝脓肿90

第四章 分子生物学诊断技术92

第一节 PCR技术92

一、原理92

二、反应成分92

三、反应条件93

四、PCR技术在寄生虫学中的应用94

第二节 核酸分子探针技术97

一、弓形虫病98

二、丝虫病99

三、疟疾100

四、囊尾蚴病101

第三节 DNA芯片技术的应用105

一、血吸虫病105

二、弓形虫病105

三、疟疾106

四、肠道原虫病106

第四节 核糖体展示技术107

一、核糖体展示技术的基本原理107

二、mRNA展示技术的基本原理107

三、核糖体展示技术基本操作过程108

第二篇 分子生物学研究技术119

第五章 蛋白质的分离、纯化与鉴定技术119

第一节 蛋白质的分离与纯化技术119

一、凝胶层析119

二、沉淀技术122

三、离子交换层析法123

四、吸附层析127

五、亲和层析128

第二节 蛋白质的理化鉴定130

一、含量测定130

二、凝胶电泳133

三、染色鉴定135

四、一维和二维肽图谱136

五、肽的反相高效液相色谱137

六、序列分析137

第六章 核酸的分离、纯化技术139

第一节 提取DNA139

一、提取原则139

二、质粒DNA的提取与纯化141

三、噬菌体DNA的提取与纯化145

四、真核细胞DNA的提取和纯化148

第二节 DNA凝胶电泳152

一、琼脂糖凝胶电泳152

二、聚丙烯酰胺凝胶电泳154

第三节 真核细胞RNA的制备157

一、异硫氢酸胍法157

二、TRIzol RNA提取试剂盒157

三、细胞质RNA的制备158

第四节 RNA凝胶电泳159

一、在含有氢氧化甲基汞的琼脂糖凝胶电泳159

二、乙二醛化RNA的琼脂糖凝胶电泳160

三、甲醛化RNA的琼脂糖凝胶电泳161

第七章 分子杂交技术163

第一节 DNA探针164

一、标记物分类164

二、标记方法分类165

第二节 寡核苷酸探针的合成165

一、用T4噬菌体多核苷酸激酶标记寡核苷酸探针166

二、用大肠杆菌DNA聚合酶I Klenow片段标记合成的寡核苷酸168

第三节 核酸分子杂交方法170

一、固相杂交171

二、液相杂交176

三、原位杂交178

四、荧光原位杂交178

第八章 基因研究技术180

第一节 克隆技术180

一、基本原理和步骤180

二、工具酶181

三、载体182

四、PCR技术184

五、目的基因的获得191

第二节 基因文库构建技术192

一、基因组DNA文库构建193

二、cDNA文库构建197

第三节 RNA干扰技术205

一、RNA干扰技术的原理及特点205

二、RNA干扰分子靶位的选择206

三、siRNA制备方法206

四、RNA干扰技术在寄生虫学研究中的应用208

第四节 DNA芯片技术211

一、芯片制备211

二、探针的准备213

三、杂交213

四、信号检测213

五、结果分析213

六、生物信息学分析214

第九章 蛋白质组学技术215

第一节 双向电泳技术215

一、双向电泳原理215

二、操作步骤216

第二节 质谱技术219

一、原理219

二、操作步骤220

第三节 蛋白质芯片技术223

一、芯片的制作与质量控制224

二、芯片的分类224

第十章 抗体技术226

第一节 单克隆抗体226

一、单克隆抗体产生的原理226

二、杂交瘤细胞系的建立226

三、单克隆抗体的制备228

四、在寄生虫中的应用229

第二节 基因工程抗体230

一、人源化的鼠单克隆抗体230

二、小分子抗体232

三、双特异性抗体233

第三节 噬菌体抗体库技术234

一、噬菌体抗体库技术234

二、在寄生虫学中的应用236

第四节 转人Ig基因小鼠的构建237

一、人Ig-YACs的构建和筛选237

二、小鼠胚胎干细胞的分离、培养237

三、含人Ig-YACs酵母与鼠ESC的融合及克隆238

四、人Ig-YACs-ESC导入鼠卵母细胞238

五、含人Ig-YACs-ESC胚胎向小鼠体内送还和子代鼠的生成240

第五节 抗体的表达242

一、原核表达242

二、真核表达244

第六节 抗体的分离、纯化、保存245

一、抗体的分离与纯化245

二、抗体的保存246

第七节 抗体的鉴定与分析246

一、抗体效价的鉴定246

二、抗体特异性鉴定247

三、抗体纯度鉴定248

四、抗体亲和力鉴定248

第八节 抗体技术在寄生虫中的应用249

一、消化道寄生虫249

二、脉管系统寄生虫250

三、肝与胆管寄生虫251

四、呼吸系统寄生虫251

五、皮肤与组织寄生虫251