基因工程学原理PDF|Epub|txt|kindle电子书版本下载

基因工程学原理PDF格式电子书版下载

注意：本站所有压缩包均有解压码： 点击下载压缩包解压工具

第1章 绪论1

1.1 基因与基因工程1

1.1.1 基因的概念1

1.1.2 基因工程与生物工程的关系2

1.2 基因工程的操作和应用3

1.2.1 基因工程的操作流程3

1.2.2 基因工程的应用3

参考文献8

第2章 生物大分子9

2.1 蛋白质的结构9

2.1.1 蛋白质的一级结构9

2.1.2 蛋白质的二级结构10

2.1.3 蛋白质的三级结构11

2.2 核酸的结构12

2.2.1 核苷酸12

2.2.2 DNA的结构12

2.2.3 RNA的结构14

2.3 蛋白质和核酸的性质16

2.3.1 蛋白质的性质16

2.3.2 核酸的性质16

2.4 大分子间的信息传导17

2.4.1 DNA的复制18

2.4.2 遗传信息的转录18

2.4.3 RNA的翻译22

参考文献25

第3章 DNA的提取与纯化27

3.1 碱抽提法提取DNA27

3.1.1 碱抽提法所用各类试剂的生化作用27

3.1.2 碱抽提法抽提DNA过程中应注意的问题29

3.2 提取DNA的其他方法30

3.2.1 质粒DNA的分离纯化30

3.2.2 基因组或其他DNA的抽提40

3.3 DNA的定量和纯度测定44

3.3.1 紫外光谱分析法45

3.3.2 EB荧光分析法45

3.3.3 水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA46

参考文献48

第4章 目的基因的获得50

4.1 基因文库的构建50

4.2 cDNA的合成和克隆52

4.2.1 mRNA的提取及其完整性的确定53

4.2.2 cDNA的合成与克隆54

4.3 化学法合成目的基因57

4.3.1 磷酸二酯法57

4.3.2 亚磷酸三酯法58

4.3.3 寡核苷酸连接法58

参考文献59

第5章 基因扩增61

5.1 PCR技术61

5.1.1 PCR技术的发明61

5.1.2 PCR技术的原理61

5.1.3 PCR技术的特点63

5.2 聚合酶链式反应的最适条件64

5.2.1 Taq DNA聚合酶64

5.2.2 引物68

5.2.3 模板69

5.2.4 dNTP70

5.2.5 Mg2+浓度70

5.2.6 PCR系统中的其他成分70

5.2.7 PCR的热循环计划70

5.3 聚合酶链反应技术的研究应用71

5.3.1 基因组克隆72

5.3.2 反向PCR与染色体步移73

5.3.3 不对称PCR与DNA序列测定73

5.3.4 RT-PCR与RNA分析74

5.3.5 基因的体外诱变与突变的检测75

5.3.6 基因组的比较研究76

参考文献76

第6章 基因的体外重组78

6.1 限制性核酸内切酶78

6.1.1 寄主的限制和修饰现象78

6.1.2 限制性核酸内切酶的类型79

6.1.3 限制性核酸内切酶的命名84

6.1.4 影响限制性核酸内切酶活性的因素85

6.1.5 限制性核酸内切酶对DNA的消化作用86

6.1.6 限制性核酸内切酶反应的终止87

6.2 克隆载体88

6.2.1 质粒载体88

6.2.2 噬菌体载体100

6.2.3 柯斯质粒载体114

6.3 DNA的连接118

6.3.1 大肠杆菌和T4噬菌体的DNA连接酶118

6.3.2 DNA片段在体内和体外的连接120

6.3.3 平齐末端的连接121

6.3.4 影响连接反应的因素124

参考文献125

第7章 基因的转移与重组体的检测127

7.1 重组体向寄主细胞的导人127

7.1.1 重组体DNA分子的转化或转染127

7.1.2 体外包装的λ噬菌体的转导129

7.2 重组体克隆的筛选与鉴定130

7.2.1 遗传检测法130

7.2.2 物理检测法135

7.2.3 核酸杂交筛选法136

7.2.4 免疫化学检测法139

7.2.5 DNA-蛋白质筛选法144

7.2.6 转译筛选法144

参考文献146

第8章 克隆基因的表达148

8.1 外源基因在原核细胞中的表达148

8.1.1 原核生物基因表达的特点148

8.1.2 基因表达的调控序列149

8.1.3 几种类型的原核表达载体154

8.1.4 提高克隆基因表达效率的途径156

8.2 外源基因在真核细胞中的表达164

8.2.1 真核细胞基因克隆载体164

8.2.2 哺乳动物基因转移的选择标记171

8.2.3 外源基因导入真核细胞的方法172

参考文献176

第9章 酵母的基因工程179

9.1 酵母基因的克隆179

9.1.1 利用大肠杆菌突变互补法克隆酵母生物合成基因179

9.1.2 穿梭质粒在大肠杆菌和酵母中的复制179

9.1.3 用简单的互补法克隆酵母基因181

9.2 以酵母为材料对真核生物功能的研究183

9.2.1 酵母的同源重组183

9.2.2 酵母基因与高等生物基因具有相似的信号途径185

9.2.3 用酵母遗传实验解答某些生化难题188

9.2.4 用酵母遗传分析鉴别和研究高等生物基因190

参考文献192

第10章 植物的基因工程193

10.1 再生植株193

10.1.1 植物在遗传工程方面的优缺点193

10.1.2 单个细胞可生长成完整植株194

10.1.3 用叶盘再生植株195

10.2 植物基因转移的途径195

10.2.1 土壤农癌杆菌的Ti质粒引起冠瘿瘤195

10.2.2 Ti质粒的T-DNA部分转移至植物细胞196

10.2.3 T-DNA经过改造后作为基因载体197

10.2.4 用报告基因证明转移基因在植物组织中的表达199

10.2.5 病毒可用作所有植物基因转移的载体200

10.2.6 用基因枪和电击法将DNA转移入植物细胞201

10.2.7 用DNA包裹的粒子轰击可产生转基因细胞器203

10.3 植物基因的表达204

10.3.1 植物表达抗感染的病毒外壳蛋白204

10.3.2 植物表达微生物毒素以阻止昆虫蚕食205

10.3.3 抗除草剂植物207

10.3.4 转基因花卉植物208

10.3.5 利用转基因植物生产有重要价值的蛋白质208

参考文献209

第11章 哺乳动物的基因工程211

11.1 将基因转移入哺乳动物细胞211

11.1.1 永久性细胞系的建立使基因转移变得实际211

11.1.2 基因转移首先用于对肿瘤病毒的研究212

11.1.3 在哺乳动物细胞中起作用的选择性标记使得可通过共转染进行基因转移213

11.1.4 外源DNA在转染入细胞后的瞬时表达216

11.1.5 用基因扩增使蛋白质高水平表达217

11.1.6 应用于特殊细胞类型的转染方法218

11.1.7 用病毒载体将外源DNA引入细胞219

11.1.8 牛痘病毒和杆状病毒用于蛋白质的高水平表达221

11.1.9 逆转录病毒作为基因转移的高效载体222

11.2 转基因小鼠224

11.2.1 外源基因整合人受体动物的染色体225

11.2.2 外源DNA可稳定地整合人生殖系细胞225

11.2.3 胚胎干细胞可携带外源基因226

11.2.4 可调节转基因的组织特异性模式228

11.2.5 转基因可在特异性组织定向表达228

11.2.6 转基因可用以杀死特异性细胞类型228

11.2.7 用反转录病毒追踪细胞来源229

11.2.8 转基因可扰乱内源性基因的功能229

11.2.9 通过同源重组进行基因剔除能说明基因系统的复杂性230

11.3 转基因家畜231

11.3.1 重组牛生长激素促进动物泌乳和改善饲料利用率231

11.3.2 转基因家畜231

11.3.3 用转基因动物生产药物蛋白232

11.3.4 通过转基因表达病毒外壳蛋白以保护家畜免受病毒感染233

参考文献233

第12章 医药工业的基因工程236

12.1 利用基因工程技术生产胰岛素和生长激素236

12.1.1 生产重组蛋白的表达系统有了很大改进236

12.1.2 胰岛素是第一个获准用于人类疾病治疗的重组体药物237

12.1.3 通过两种方法生产人的重组生长激素238

12.2 利用基因工程技术生产疫苗和其他复杂蛋白质240

12.2.1 乙型肝炎病毒疫苗的生产240

12.2.2 用哺乳类培养细胞大规模生产人的复杂蛋白质241

12.3 利用基因工程技术生产抗体243

12.3.1 单克隆抗体243

12.3.2 对识别特异性抗原的抗体直接克隆和选择244

12.3.3 人源化单克隆抗体保持免疫活性但失去免疫原性245

12.3.4 蛋白质工程使抗体具有特殊用途246

参考文献247