图书介绍
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- 王丽编著 著
- 出版社： 长春：东北师范大学出版社
- ISBN：7560232167
- 出版时间：2002
- 标注页数：284页
- 文件大小：111MB
- 文件页数：299页
- 主题词：
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图书目录
第一部分 基因工程原理1
第一章 绪论1
1.1 基因工程的发展史1
1.1.1 理论上三个重要的发现1
1.1.2 技术上三个重要的成果2
1.2 基因工程的研究内容3
1.2.1 基因工程3
1.2.2 基因工程的研究内容4
1.3 基因工程的应用5
1.3.1 在医药业的应用5
1.3.2 在农业方面的应用8
1.3.3 在畜牧业方面的应用9
思考题10
第二章 基因工程的基本操作程序11
2.1 带有目的基因的DNA片段的制备11
2.1.1 从已有的生物基因组中分离11
2.1.2 人工合成法13
2.2 DNA片段与载体DNA体外重组15
2.2.1 DNA分子的剪切15
2.2.2 DNA分子的连接15
2.2.3 碱性磷酸酶的作用19
2.3 DNA重组体转入受体细胞20
2.3.1 受体细胞20
2.3.2 DNA重组体转入受体细胞23
2.4 重组体克隆的筛选与鉴定24
2.4.1 表型直接筛选法24
2.4.2 菌落或噬菌斑原位杂交24
2.5 外源基因的表达25
2.5.1 启动子25
2.5.2 核糖体结合位点27
2.5.3 真核基因在大肠杆菌体系中的表达28
思考题29
第三章 基因工程的工具酶30
3.1 引言30
3.2 剪切酶31
3.2.1 限制性核酸内切酶31
3.2.2 核酸外切酶37
3.2.3 DNA酶38
3.3 修饰酶39
3.3.1 磷酸酶39
3.3.2 甲基化酶39
3.3.3 聚合酶40
3.4 连接酶43
3.4.1 连接反应43
3.4.2 连接酶43
思考题44
第四章 基因工程的载体45
4.1 质粒46
4.1.1 一般生物学性状46
4.1.2 作为载体的特性47
4.1.3 两种常用的质粒49
4.1.4 利用质粒进行克隆54
4.2 噬菌体λ56
4.2.1 一般生物学特性56
4.2.2 利用噬菌体λ进行克隆59
4.2.3 λZAP64
4.3 单链噬菌体（M13系列）65
4.3.1 一般生物学特性65
4.3.2 丝状噬菌体载体及M13载体67
4.3.3 噬菌体展示系统70
4.4 粘粒72
思考题73
第五章 基因文库的构建74
5.1 基因组文库75
5.1.1 原理75
5.1.2 构建的程序77
5.2 cDNA文库82
5.2.1 原理82
5.2.2 构建的程序82
5.3 特殊序列文库85
5.4 酵母人工染色体87
思考题89
第六章 聚合酶链反应90
6.1 基本原理90
6.1.1 反应过程91
6.1.2 反应物主要成分93
6.1.3 基本操作95
6.2 PCR的种类96
6.2.1 反向PCR96
6.2.2 跳跃PCR97
6.2.3 锚式PCR98
6.3 应用PCR时的注意事项99
6.3.1 引物的设计99
6.3.2 实验操作101
6.3.3 避免序列的错误扩增101
6.3.4 污染问题102
6.4 PCR的应用102
6.4.1 在医学方面的应用102
6.4.2 在基础研究方面的应用104
思考题105
第七章 人类基因组计划106
7.1 人类基因组计划的概述106
7.1.1 人类基因组计划的由来106
7.1.2 人类基因组计划的目标107
7.1.3 人类基因组研究的应用108
7.2 人类基因组研究的主要内容113
7.2.1 建立遗传图谱113
7.2.2 建立物理图谱114
7.2.3 DNA序列测定115
7.2.4 基因的确定和分析115
7.3 人类基因组研究的策略116
7.3.1 人类基因组研究的基本思路116
7.3.2 确定特定的基因118
7.3.3 利用染色体特征研究人类基因组120
7.4 人类基因组研究引发的社会和伦理问题122
7.4.1 伦理和社会学方面122
7.4.2 商业与法律方面124
7.5 人类基因组计划的研究现状与展望125
7.5.1 研究现状125
7.5.2 展望127
思考题133
第八章 基因工程的安全防护134
8.1 生物公害134
8.2 生物公害的控制135
8.2.1 实验人员适应性训练135
8.2.2 生物防护136
8.2.3 物理防护137
8.2.4 重组体的保管137
8.3 植物基因工程的潜在危害和防护138
8.4 中国的《基因工程安全管理办法》138
8.4.1 适用范围139
8.4.2 管理体系139
思考题140
第二部分 基因工程常用技术143
第九章 质粒DNA的提取与纯化143
9.1 概论143
9.1.1 细菌培养物的培养143
9.1.2 细菌的收获和裂解144
9.1.3 质粒DNA的提取和纯化145
9.2 质粒DNA的小量制备146
9.2.1 细菌的收获146
9.2.2 细菌的裂解147
9.3 质粒DNA的大量制备150
9.3.1 在丰富培养基中扩增质粒150
9.3.2 细菌的收获151
9.3.3 细菌的裂解151
9.4 质粒DNA的纯化155
9.4.1 聚乙二醇沉淀法155
9.4.2 氯化铯—溴化乙锭梯度平衡离心法157
9.4.3 纯化后的处理159
第十章 DNA凝胶电泳技术165
10.1 琼脂糖凝胶电泳166
10.1.1 概论166
10.1.2 琼脂糖凝胶的制备及检测171
10.1.3 DNA的回收与纯化177
10.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳185
10.2.1 概论185
10.2.2 非变性聚丙烯酰胺凝胶187
10.3 其他类型的凝胶电泳195
10.3.1 链分离凝胶电泳195
10.3.2 变性梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳196
10.3.3 脉冲电场凝胶电泳196
第十一章 RNA分析的主要方法198
11.1 RNA分析概述198
11.2 Northern杂交简介199
11.3 RNA电泳201
11.3.1 经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳201
11.3.2 在含有甲醛的凝胶上进行的RNA电泳203
11.4 转膜205
11.4.1 变性RNA转移至硝酸纤维素滤膜205
11.4.2 变性RNA转移至尼龙膜209
11.5 转膜前后的RNA染色210
11.5.1 方法Ⅰ210
11.5.2 方法Ⅱ210
11.6 杂交和放射自显影211
第十二章 Southern杂交213
12.1 概述213
12.2 基因组DNA的分离214
12.3 将DNA从凝胶转至固相支持体上215
12.3.1 转移的方法215
12.3.2 DNA转移至硝酸纤维素滤膜218
12.3.3 DNA从凝胶转移至尼龙膜221
12.4 探针与固定化的核酸杂交223
12.4.1 探针与固定于膜上的DNA杂交224
12.4.2 放射性标记的寡核苷酸与基因组DNA杂交229
12.4.3 从杂交膜上除去放射性标记的探针231
第十三章 Western印迹法233
13.1 概述233
13.2 蛋白样品的制备和电泳235
13.2.1 裂解哺乳动物细胞和组织235
13.2.2 电泳237
13.3 将蛋白质从凝胶转移至固相支持体238
13.4 对固定化的蛋白质进行染色241
13.5 封闭杂交膜上的免疫球蛋白结合位点243
13.6 抗体和靶蛋白的结合244
13.6.1 第一抗体与硝酸纤维素滤膜共温育的方法244
13.6.2 二级免疫试剂与硝酸纤维素滤膜共温育的方法245
13.6.3 酶联抗体生色底物的使用247
第十四章 DNA序列测定250
14.1 概述250
14.1.1 Sanger双脱氧链终止法251
14.1.2 Maxam-Gilbert DNA化学降解法255
14.2 随机测序256
14.2.1 靶DNA的纯化和连接258
14.2.2 靶DNA的断裂260
14.2.3 DNA的修补及大小选择262
14.2.4 载体DNA的制备263
14.2.5 靶DNA片段与载体DNA连接264
14.3 定向测序265
14.3.1 生成若干套嵌套的缺失突变体265
14.3.2 利用外切核酸酶Ⅲ生成嵌套的缺失突变体268
14.4 Sanger双脱氧链终止法测序271
14.4.1 准备271
14.4.2 配制凝胶274
14.4.3 加样及电泳277
14.4.4 测序凝胶的放射自显影278
14.4.5 从凝胶上读取DNA序列279
参考文献281