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第1章 绪论1

1.1 病毒形态、结构和化学组分1

1.1.1 电镜下的病毒形态1

1.1.2 病毒的结构4

1.1.3 病毒的组分7

1.2 病毒分类系统10

1.2.1 病毒的主要类群11

1.2.2 病毒的分类和命名12

1.2.3 病毒分类系统15

1.3 病毒入侵、繁殖及病理变化16

1.3.1 病毒的入侵16

1.3.2 病毒的繁殖18

1.3.3 病毒引起宿主细胞的病理变化20

1.3.4 病毒的释放28

1.4 病毒的电镜诊断和鉴定29

1.4.1 病毒电镜诊断鉴定的依据29

1.4.2 病毒电镜诊断鉴定的特点31

第2章 病毒样品的超薄切片技术37

2.1 常温超薄切片技术的取材与固定38

2.1.1 取材38

2.1.2 固定39

2.2 常温超薄切片技术的脱水、渗透和包埋51

2.2.1 脱水51

2.2.2 渗透和包埋53

2.3 常温超薄切片的制作和染色57

2.3.1 常温超薄切片的制作方法57

2.3.2 染色液和染色方法64

2.4 冷冻超薄切片技术67

2.4.1 取材、醛固定和包封67

2.4.2 冷冻保护处理与冷冻固定69

2.4.3 冷冻超薄切片71

2.5 冷冻置换技术74

2.5.1 冷冻置换的基本原理74

2.5.2 冷冻置换介质74

2.5.3 冷冻置换的方法75

2.5.4 影响冷冻置换的因素76

第3章 病毒的分离、纯化与病毒样颗粒的组装78

3.1 病毒的分离纯化79

3.1.1 病毒的分离79

3.1.2 病毒的纯化82

3.2 病毒纯化的超速离心技术83

3.2.1 原理与设备84

3.2.2 病毒离心纯化方法87

3.3 病毒衣壳蛋白的体外表达与病毒样颗粒的组装90

3.3.1 病毒样颗粒在大肠杆菌表达系统中的表达与组装91

3.3.2 病毒样颗粒在昆虫杆状病毒表达系统中的表达与组装94

3.3.3 病毒样颗粒体外表达研究进展100

3.4 负染色技术101

3.4.1 负染色液的制备102

3.4.2 染色方法102

3.4.3 操作中的注意事项103

第4章 病毒免疫电镜技术106

4.1 概述106

4.2 抗原-抗体免疫复合物电镜技术107

4.2.1 吸附法107

4.2.2 修饰法107

4.2.3 吸附-修饰法108

4.2.4 凝集法109

4.3 免疫标记电镜技术的基本方法109

4.3.1 取材与固定109

4.3.2 免疫标记方法110

4.3.3 样品包埋112

4.3.4 对照实验114

4.4 铁蛋白标记电镜技术114

4.4.1 铁蛋白标记抗体的制备114

4.4.2 铁蛋白标记电镜技术的应用115

4.5 酶标记电镜技术116

4.5.1 酶标记抗体116

4.5.2 PAP技术117

4.5.3 酶标记电镜技术的应用117

4.6 胶体金标记电镜技术118

4.6.1 胶体金探针的制备技术119

4.6.2 胶体金标记电镜技术的应用123

4.7 电镜原位杂交技术129

4.7.1 同位素标记cRNA探针电镜原位杂交130

4.7.2 生物素标记DNA探针电镜原位杂交131

4.7.3 地高辛标记rRNA探针电镜原位杂交133

4.7.4 电镜原位杂交技术的注意事项134

第5章 生物样品的高分辨电子显微技术135

5.1 电子显微镜的发明135

5.2 磁透镜的光学性质137

5.2.1 磁透镜的聚焦原理137

5.2.2 磁透镜的像差139

5.2.3 磁透镜的分辨本领、景深和焦深141

5.3 像的反差形成原理143

5.3.1 散射反差的形成与提高方法144

5.3.2 提高散射反差的方法145

5.3.3 相位反差147

5.3.4 电子衍射149

5.4 生物样品的高分辨成像技术152

5.4.1 合轴、消像散和聚焦153

5.4.2 生物样品的高分辨成像161

第6章 冷冻电镜单颗粒技术与病毒研究166

6.1 病毒的冷冻电镜成像167

6.1.1 如何获得玻璃态的冰168

6.1.2 冷冻制样与样品传输169

6.1.3 低剂量成像172

6.1.4 冷冻电镜图像的复原174

6.2 病毒三维重构的单颗粒技术175

6.2.1 单颗粒技术的发展现状176

6.2.2 病毒的结构特点178

6.2.3 中央截面定理181

6.2.4 取向和中心估计182

6.2.5 重构基本流程185

6.3 家蚕质多角体病毒（BmCPV）的形态与结构研究189

6.3.1 CPV在8？分辨率下的结构190

6.3.2 CSP蛋白的构象变化及其无缝连接190

6.3.3 LPP蛋白的构象变化及其分子铆接作用193

6.3.4 TP蛋白的功能结构域及衣壳锚定作用193

6.3.5 转录酶复合物（TEC）及dsRNA病毒的内转录机制模型196

6.3.6 A球突蛋白及其MAb抗体复合物的研究200

6.4 乙型肝炎病毒的结构研究202

6.5 戊型肝炎病毒结构研究进展203

第7章 电子断层成像技术与病毒研究209

7.1 电子断层成像技术简介209

7.1.1 电子断层成像原理209

7.1.2 多角度系列电子投影图像的获取210

7.1.3 投影图像的配准211

7.1.4 断层图像的三维重构211

7.1.5 重建结果的去噪、分割和理解212

7.2 电子断层成像技术在病毒研究中的应用212

7.2.1 电子断层成像研究的样品制备212

7.2.2 电子断层成像技术用于病毒颗粒的三维结构研究213

7.2.3 电子断层成像用于病毒与细胞的相互作用研究218

7.2.4 电子断层成像技术在其他方面的应用及展望219

参考文献221

附录 国际病毒分类系统的科与属（ICTV,2009年）228